Главная / Старшие классы / Разное

экспериментальная работа

ГИДРОЛИЗ НУКЛЕОПРОТЕИДОВ ДРОЖЖЕЙ

Кислотный гидролиз используется для изучения химического состава нуклеопротеидов.

СХЕМА ГИДРОЛИЗА НУКЛЕОПРОТЕИДОВ

НУКЛЕОПРОТЕИДЫ (дрожжи)

H2SO4 10%

100oC

БЕЛОК НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ

(протамины или гистоны) (ДНК, РНК)


ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ

ПОЛИПЕПТИДЫ ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ


ТРИ-, ДИПЕПТИДЫ


СВОБОДНЫЕ АМИНОКИСЛОТЫ МОНОНУКЛЕОТИДЫ

НУКЛЕОЗИДЫ ФОСФОРНАЯ

КИСЛОТА

ПУРИНОВЫЕ ДЕЗОКСИРИБОЗА

ИЛИ ПИРИМИДИНОВЫЕ ИЛИ РИБОЗА

АЗОТИСТЫЕ ОСНОВАНИЯ

Продукты гидролиза открывают специфическими реакциями: полипептиды – биуретовой реакцией; пуриновые основания – серебряной пробой (серебряные соли пуринов имеют светло-коричневый осадок), пентозы – пробой Троммера (образуется красное окрашивание вследствие окисления рибозы), фосфорную кислоту – молибденовой пробой (образуется фосфорномолибденовокислый аммоний – желтый кристаллический осадок).

ХОД РАБОТЫ:взять колбу, внести 5 г дрожжей + 40 мл 10%-го раствора H2SO4, закрыть пробкой со стеклянной трубкой и поставить для кипения (100оС) на 60 минут.

Через час охладить и отфильтровать.В фильтрате открывают продукты гидролиза.

Взять четыре пробирки и в каждой выполнить реакцию:

ОТМЕРИТЬ

ОПЫТ

  • БИУРЕТОВАЯ
  • РЕАКЦИЯ

    Гидролизат

    NaOH 10%

    CuSO4 1 %

    5 капель

    10 капель

    1 - 2 капли

    Образуется фиолетовое окрашивание

  • СЕРЕБРЯНАЯ
  • ПРОБА НА ПУРИНЫ

    Гидролизат

    (NH4)OH конц.

    AgNO3 1 %

    10 капель

    1 каплю

    5 капель

    Оставить на 5 мин

    Образуется светло-коричневый осадок.

    3. ПРОБА ТРОММЕРА

    НА РИБОЗУ И

    ДЕЗОКСИРИБОЗУ

    Гидролизат

    NaOH 30 %

    CuSO4 7 %

    5 капель

    10 капель

    3 капли

    Нагреть, до начала кипения, выпадает красный осадок Cu2O или желтый CuOH

    4. МОЛИБДЕНОВАЯ

    ПРОБА НА ФОСФОРНУЮ КИСЛОТУ

    Молибденовый реактив

    Гидролизат

    20 капель

    5 капель

    Кипятить несколько минут, получается окраска лимонно-желтого цвета.

    Выделение рибонуклеопротеида (РНП) из дрожжей

    Материалы, реактивы, посуда и приборы:

    Пекарские или пивные дрожжи Орциновый реактив

    Диэтиловый эфир Раствор флороглюцина

    Песок, промытый и прокаленный Фелингова жидкость

    Ступки Раствор аммиака (конц.)

    Центрифуга 1 %-ный раствор AgNO3

    Стакан на 100-200 мл Раствор молибдата аммония

    (NH4)2MoO7

    0,4 %-ный раствор NaOH Магнезиальная смесь

    10 %-ный раствор СН3СООН Колба круглодонная на 100 мл с об-

    Лакмусовая бумага ратным воздушным холодильником

    2 н раствор NaOH Воронка D= 7 – 8 см

    1 %-ный раствор сульфата меди (II) Стеклянная палочка

    Реактив Миллона Пробирка

    1 н и 2 н раствор соляной кислоты Мерный цилиндр на 50 – 100 мл

    Ход работы

    10 гдрожжей смешать в ступке со смесью 2 мл эфира и 2 мл воды, добавить 5 г речного песка и тщательно растереть, приливая к растертой массе небольшими порциями 40 – 50 мл 0,4 %-ного раствора NaOH. Растирание продолжать 15 – 20 минут, после этого осадок отфильтровать или отделить центрифугированием. Центрифугат слить в стакан и прибавить к нему небольшими количествами (по 0,5 мл) 10 %-ный раствор СН3СООН до слабокислотной реакции по лакмусу (5 – 6 мл). Полученный осадок нуклеопротеида отделить путем центрифугирования.

    Гидролиз нуклеопротеида

    Одним из простейших способов разложения РНП является нагревание его в течение 1 часа при 100 ºC в 1 н растворе соляной кислоты. Прежде всего происходит расщепление нуклеопротеидов на белок и нуклеиновую кислоту. Далее белок гидролизуется до аминокислот, но в этих условиях гидролиз белка будет очень незначительным. РНК в этих условиях расщепляется с образованием пиримидиновых нуклеотидов, пуриновые же распадаются до пуринов, рибозы и фосфорной кислоты.

    В колбу для гидролиза (с обратным воздушным холодильником) поместить осадок нуклеопротеида и равный ему объем 2 н раствора соляной кислоты и сверх этого еще 20 мл 1 н раствора этой кислоты. Колбу закрыть пробкой с проходящим через нее воздушным холодильником (трубка длиной 70 см и D=0,7 – 0,8 см) и смесь кипятить на плитке с асбестовой сеткой в течение 1 часа, поддерживая только слабое кипение, во избежание улетучивания HCl. Гидролизат отфильтровать и в прозрачном растворе определить наличие белка, пентозы, пуриновых оснований и фосфорной кислоты.

    Белок обнаруживается с помощью биуретовой реакции. (Биуретовая реакция с СuSO4 и NaOH (конц.)).

    Пентоза (рибоза)обнаруживается по реакции с орцином и флороглюцином, либо путем восстановления меди в растворе фелинговой жидкости.

    Пуриновые основанияобнаруживаются по их реакции с аммиачным раствором гидроксида серебра. К 2 мл гидролизата прилить по каплям раствор аммиака (конц.) до щелочной реакции по лакмусу и добавить равный объем заранее приготовленного аммиачного раствора гидроксида серебра. Постепенно образуется хлопьевидный осадок серебряных солей пуриновых оснований.

    Фосфорная кислотаобнаруживается с помощью молибдата аммония или магнезиальной смеси.

    К 2 мл раствора молибдата аммония в азотной кислоте прибавить 1 мл испытуемого раствора. Смесь слегка нагреть. Образуется желто-зеленый осадок состава (NH4)3PO4 · 12MoO3.

    КИСЛОТНЫЙ ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ

    ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ:Гидролиз белка – это расщепление биополимера с присоединением воды по месту разрыва пептидных связей под действием кислот, оснований или протеаз. Последовательность гидролиза белка показана на схеме.

    В лабораторных условиях гидролиз белков используется для определения первичной структуры, аминокислотного состава белков. Гидролизаты белков применяются в качестве лечебных препаратов при парентеральном питании. В организме человека и животных постоянно происходит гидролиз белков в пищеварительном тракте и клетках органов под действием протеолитических ферментов.

    ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА:Большинство биополимеров в реакциях с водой распадаются на мономеры. Гидролиз катализируют протоны, ионы гидроксила и ферменты по механизму нуклеофильного замещения у углерода с карбонильной группой. Полный кислотный гидролиз белков при кипячении происходит в течение 12-96 часов.

    ХОД РАБОТЫ:

  • В химическую колбу внести 20 мл раствора яичного белка.
  • Добавить 5 мл концентрированной НCl
  • Отливают 0,5 – 1 мл смеси в пробирку ( № 1), (5 капель)
  • Колбу закрывают резиновой пробкой с длинной стеклянной трубкой (обратный холодильник)
  • Содержимое колбы кипятить под вытяжкой в течение 45 минут
  • После охлаждения отливают 0,5 – 1 мл гидролизата в пробирку ( № 2) (5 капель)
  • ¯

  • Нейтрализуют содержимое пробирок 20 % NaOH по лакмусу до голубой окраски
  • Проводят биуретовую реакцию в пробирках № 1 и № 2.
  • РЕЗУЛЬТАТ:

    В Ы В О Д:

    Исследование состава молока Цель работы:разделить молоко на составные части и исследовать их

    Реактивы: Оборудование:

    Молоко Колба коническая – 2 шт.

    Уксусная кислота Химический стакан на 400 мл

    Мел Воронка

    Азотная кислота (конц.) Фильтровальная бумага

    10 %-ный раствор гидроксида натрия Марля

    2 %-ный раствор сульфата меди Горелка

    Аммиачный раствор гидроксида серебра Пробирки

    [Ag(NH3)2]OH

    Молоко содержит сразу три ценных питательных вещества: 1) жир; 2) белок – казеин; 3) углевод – лактозу (восстанавливающий дисахарид, состоящий из двух гексоз – глюкозы и галактозы).

    Ход работы

    1. Налейте в колбу 40 мл молока. Для отделения белка прилейте несколько капель уксусной кислоты. При этом казеин сворачивается и образует творожистый осадок (творог).

    2. Натяните на стакан марлю, сложенную в четыре слоя, и отфильтруйте через нее казеин. Собранный в марле казеин немного отожмите над стаканом и промойте его через марлю струей воды.

    3. Фильтрат в стакане содержит лактозу и уксусную кислоту. Чтобы нейтрализовать кислоту, добавляйте понемногу мел и перемешивайте содержимое стакана до тех пор, пока не перестанет выделяться газ.

    4. Профильтруйте раствор через бумажный фильтр в колбу. Докажите, что фильтрат содержит углевод лактозу (разделите раствор на порции и проведите качественные реакции на карбонильную группу – “серебряное зеркало” – и на гидроксильные группы – с гидроксидом меди (II)).

    5. Поместите немного белка в три пробирки и проведите качественные реакции на белок (нингидриновую, биуретовую, ксантопротеиновую).

    6. Запишите уравнения проделанных реакций.

    Сделайте вывод о проделанной работе.

    Определение содержания лактозы цианидным способом

    Для определения содержания лактозы в молоке и в молочных продуктах можно использовать метод Бертрана или цианидный метод. Второй метод основан на способности редуцирующих сахаров восстанавливать в щелочном растворе красную кровяную соль К3[Fe(CN)6] в желтую К4[Fe(CN)6] при нагревании. Реакция с участием лактозы протекает по схеме:

    лактоза + 2 К3[Fe(CN)6] + 2КОН лактобионовая кислота + 2 К4[Fe(CN)6] + Н2О

    В качестве индикатора используют метиленовую синь, которая в конце реакции восстанавливается лактозой с образованием бесцветного соединения.

    Реактивы и оборудование:

    1 %-ный раствор гексацианоферрата (III) калия Мерная колба на 250 мл

    20 %-ный раствор сульфата цинка Мерный цилиндр на 10 мл

    Раствор гидроксида натрия (с = 2,5 моль/л) Бюретка на 25 мл

    0,2 %-ный раствор метиленовой сини Капельница

    Конические колбы на 100 и 250 мл Электроплитка

    Воронка с бумажным фильтром Водяная баня

    Термометр Молоко

    Дистиллированная вода

    1. Приготовление испытуемого раствора лактозы

    В мерную колбу на 250 мл с помощью бюретки налить 25 мл молока. Остатки смыть дистиллированной водой объемом не более 150 мл. Колбу поставить на водяную баню при 60 ºС на 15 минут и периодически перемешивать. Затем колбу охладить и для осаждения белков добавить 3 – 4 мл раствора сульфата цинка и 1,5 – 2 мл раствора гидроксида натрия. Смесь встряхнуть, довести объем раствора водой до метки, перемешать, дать осадку отстояться 10 – 15 минут и отфильтровать через складчатый фильтр в сухую колбу. Раствор готов для анализа.

    2. Ход определения

    В бюретку налить раствор лактозы. В коническую колбу на 100 мл с помощью мерного цилиндра налить 10 мл раствора К3[Fe(CN)6], 2,5 мл щелочи и одну каплю метиленовой сини. Смесь поставить на электроплитку и нагреть до кипения. Поддерживая слабое кипение, смесь оттитровать испытуемым раствором, добавляя его примерно по 1 капле в секунду, до перехода зеленой окраски (через фиолетовую) в светло-желтую.

    При охлаждении раствор приобретает фиолетовую окраску из-за окисления бесцветной формы метиленовой сини кислородом воздуха.

    Массовая доля лактозы в молоке рассчитывается по формуле:

    ω= 0,012 · V1 · 100 % /V2 · m

    где 0,012 – масса лактозы, необходимой для восстановления 10 мл 1 %-ного раствора К3[Fe(CN)6], г

    V1 – общий объем испытуемого раствора, равный 250 мл

    V2 – объем испытуемого раствора, пошедшего на титрование 10 мл раствора К3[Fe(CN)6]

    m – масса молока (25 г)

    Пример. На титрование 10 мл раствора К3[Fe(CN)6]израсходовано 2,9 мл испытуемого раствора лактозы.

    ω= 0,012 · 250 · 100 % / 2,9 · 2,5= 4,1%

    Сделайте выводы о содержании лактозы в молоке.

    определение содержания крахмала в пищевых продуктах

    Реактивы и оборудование:

    Мерная колба на 200 мл

    Колбы конические на 200 мл с обратным холодильником

    Ступки фарфоровые (диаметр 90 мм) с пестиками

    Пипетки градуированные на 1, 5, 10 мл

    Пипетки Мора на15, 25мл

    Бюретка на 25, 50 мл

    Стеклянные стаканы на 200 мл

    Мерный цилиндр на 100 мл

    Предметные стекла

    Стеклянная палочка

    Электроплитка

    Водяная баня

    25 %-ный раствор соляной кислоты

    10 %-ный раствор хлорида натрия

    0,1 н раствор йода в йодиде калия

    0,1 н раствор тиосульфата натрия

    0,5 н раствор гидроксида натрия

    2 н раствор серной кислоты

    1 %-ный раствор крахмала

    Дистиллированная вода

    Крахмалсодержащие продукты (картофель, мука и т.д.)

    Ход работы

    По 1 гкрахмалсодержащих продуктов измельчить. В мерные колбы на 200 млцилиндром отмерить по 50 млхолодной дистиллированной воды и перенести туда исследуемый продукт. Быстро влить в колбы по 100 млгорячей дистиллированной воды и сразу же поместить их в кипящую водяную баню на 1 час,чтобы полностью перевести крахмал в раствор. Содержимое колб необходимо периодически перемешивать, при этом крахмальные зерна набухнут и распадутся. Затем колбы вынуть из бани, охладить до 40 ºС. Пипеткой прибавить к содержимому колб 10 млраствора слюны и 5 мл10 %-ного раствора хлорида натрия для активации фермента амилазы слюны.

    Для ферментативного гидролиза опустить колбы в водяную баню при 37 – 40 ºС на 1 час. Степень гидролиза крахмала и момент его завершения устанавливается по реакции с йодом. Для этого стеклянной палочкой из колбы достают каплю жидкости с твердыми частицами, переносят пробу на предметное стекло и приливают несколько капель раствора йода в йодиде калия. Исчезновение синего окрашивания при действии йода на пробу свидетельствует об окончании гидролиза крахмала.

    Колбу довести водой до метки, тщательно перемешать ее содержимое и отфильтровать в сухой стакан.

    Образовавшиеся в результате действия амилазы декстрины и мальтозу гидролизовать 25 %-ной соляной кислотой. Для этого 100 мл фильтрата перенести в коническую колбу на 200 мл. Добавить 12 мл 25 %-ного раствора соляной кислоты и выдержать колбу на кипящей водяной бане с обратным холодильником 1 час. По окончании гидролиза коническую колбу охладить, раствор полностью перенести в мерную колбу на 200 мл, довести раствор до метки дистиллированной водой.

    В полученном растворе определить содержание глюкозы йодометрией. Для этого в коническую колбу с помощью пипетки поместить 10 мл полученного раствора, 15 мл 0,1 нраствора йода, затем медленно добавить 25 мл0,5 нраствора гидроксида натрия при энергичном помешивании до исчезновения окраски йода. Через 15 минут в колбу прибавить 5 мл2 нраствора серной кислоты и оттитровать выделившийся йод 0,1 нраствором тиосульфата натрия. Когда раствор станет соломенно-желтым, добавить пипеткой 1 мл1 %-ного раствора крахмала на каждые 50 млжидкости.

    Параллельно выполняется контрольный опыт, в котором вместо гидролизата берется такой же объем дистиллированной воды. Содержание крахмала (ги %) в продукте рассчитывается по формуле:

    C= (V– V1) · V2 · 0,009 · 0,9 / (a· V3)

    V– объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия, израсходованного на титрование контрольной пробы, мл;

    V1 – объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия, израсходованного на титрование пробы, мл;

    V2 – объем вытяжки из растительного материала, мл (в данном случае 400 мл);

    0,009 – коэффициент пересчета результатов титрования на содержание глюкозы;

    0,9 – коэффициент пересчета глюкозы в крахмал;

    a– навеска исследуемого материала, г (в данном случае 100г);

    V3– объем гидролизата, взятого для йодометрического определения глюкозы, мл(10мл)

    Определение молочной кислоты и мочевины в смывах с кожи рук

    Материалы, посуда, реактивы:

    Стакан на 50 мл

    Пробирки

    Водяная баня

    Мерный цилиндр

    Пипетки на 1 и 2 мл

    1 %-ный раствор хлорида железа (III)

    Дистиллированная вода

    0,5 – 1 %-ный раствор молочной кислоты или сегнетовой соли

    1 %-ный спиртовой раствор диметилглиоксима

    25 %-ный раствор серной кислоты

    0,01 или 0,02 %-ный раствор мочевины

    Ход работы

    Процедура забора материала предельно проста: в стаканчик на 50 мл налить 3 мл дистиллированной воды и в ней тщательно ополоснуть концевые фаланги 3 – 4 пальцев руки. В результате с кожной поверхности смываются различные водорастворимые метаболиты (аминокислоты, аммонийные соли, глюкоза, мочевина и т.п.).

    Полученный смыв с кожи разделить на две части (2 и 1 мл). К 2 мл смыва добавлить 0,1 мл 1 %-ного раствора хлорида железа (III), сразу же появляется желтое окрашивание. Это так называемая реакция Берга, которую дают алифатические гидроксикислоты. В полученном образце это главным образом молочная кислота, точнее ее соли, лактаты, образующиеся в результате анаэробного гликолиза в тканях и выделяющиеся в том числе и через кожные покровы. Для наглядности ставят еще две пробы: одна – с чистой водой (окраски нет), другая – с 0,5 – 1 %-ным раствором молочной кислоты или сегнетовой соли. Во второй пробе при добавлении хлорида железа (III) развивается такое же желтое окрашивание, как в пробе с кожным смывом.

    Ко второй порции смыва (1 мл) можно добавить 1 мл 0,2 %-ного раствора диметилглиоксима в 25 %-ной серной кислоте, пробу перемешать и поставить в кипящую водяную баню на 5 – 10 минут до появления ярко-желтого окрашивания. В присутствии серной кислоты диметилглиоксим довольно быстро разрушается, по-видимому, с образованием диацетила (обладает характерным кисловатым запахом), и через 3 – 4 дня раствор диметилглиоксима становится непригодным.

    Более приемлемый вариант постановки цветной реакции на мочевину следующий. К 1 мл смыва с кожи добавить 0,2 мл 1 %-ного спиртового раствора диметилглиоксима и 1 мл 25 %-ной серной кислоты. Пробу перемешать и поставить в кипящую водяную баню на 5 – 10 минут. В данном случае реактивы неограниченно устойчивы.

    Для большей наглядности можно поставить контрольную пробу с чистой дистиллированной водой и пробу с 0,01 или 0,02 %-ным раствором мочевины. При нагревании с диметилглиоксимом в контрольной пробе окраски нет, а во второй пробе окраска такая же, как в пробе с кожным экскретом.


    ОПРЕДЕЛЕНИЕ КИСЛОТНОСТИ МОЛОКА

    При определении доброкачественности молока прежде всего определяют его кислотность. Кислотные свойства свежего молока обусловливаются белками, гидрофосфатами и гидроцитратами, дающими ионы водорода. При хранении молока кислотность его повышается вследствие образования молочной кислоты из молочного сахара под влиянием ферментов, выделяемых молочнокислыми бактериями, попадающими из воздуха. Образующаяся молочная кислота осаждает белок – казеин.

    Кислотность молока принято выражать в градусах Тернера (Т). Под градусами Тернера понимают число миллилитров 0,1 н раствора щелочи, необходимых для нейтрализации 100 мл молока. Свежее молоко должно иметь кислотность не выше 20 – 21 ºТ. Свертывание казеина происходит при 27 – 30 ºТ.

    Реактивы и оборудование:

    Бюретка

    Коническая колба на 50 – 100 мл

    Пипетка на 10 мл

    Штатив металлический с зажимом

    Мензурка

    Молоко

    Дистиллированная вода

    0,1 н раствор щелочи

    2 %-ный спиртовой раствор фенолфталеина

    Ход работы

    10 мл молока вносят пипеткой в колбу, добавляют 20 мл дистиллированной воды и 3 – 5 капель фенолфталеина, смесь взбалтывают. Затем отмечают уровень раствора щелочи в бюретке и постепенно (каплями) приливают его к молоку при взбалтывании до появления слабо-розового цвета, не исчезающего в течение 1 – 2 минут. Число мл раствора щелочи, пошедших на нейтрализацию взятого объема молока, умноженное на 100 (расчеты ведут на 100 мл), показывает кислотность молока в градусах Тернера.

    Выделение казеина из молока.

    В молоке содержится специфический белок казеин, содержащий фосфор. Содержание этого белка в молоке составляет 80 % от общего числа белков. Казеин обладает кислотными свойствами и находится в молоке в виде растворимой кальциевой соли. При подкислении белок выпадает в осадок в виде белых рыхлых хлопьев, которые легко отделяются при фильтровании.

    Выделение жира из молока.

    К 6 мл цельного молока прибавляют 2 мл 10 %-ного раствора Na2CO3, хорошо перемешивают и взбалтывают с 5 мл эфира. Эфирный слой помещают в чашечку для выпаривания на водяную баню (под тягой). После испарения эфира остается сливочное масло – молочный жир.

    Специфичность действия сахаразы дрожжей

    Реактивы

    1 Пекарские дрожжи.

    2 Раствор крахмала 1 %.

    3 Раствор сахарозы 1 %.

    4 Сульфат меди (1 % водный раствор).

    5 Гидроксид натрия (10 % водный раствор).

    6 Дистиллированная вода.

    7 Весы.

    8 Стеклянная воронка.

    9 Бумажный фильтр.

    Посуда и приборы

    1 Пробирки

    2 Термометр – 1.

    3 Держатель

    4 Ступка фарфоровая с пестиком

    5 Водяная баня – 1.

    6 Секундомер – 1.

    Фермент сахараза катализирует гидролитическое расщепление сахарозы с образованием глюкозы и фруктозы. Действие фермента можно обнаружить по появлению свободной глюкозы, дающей положительную качественную реакцию на свободный полуацетальный гидроксил (реакция "серебряного зеркала", с реактивом Фелинга и т.п.). Сахароза не содержит свободного полуацетального гидроксила, поэтому в подобные превращения не вступает.

    Ход работы

    1. Для получения сахаразы навеску 0,5 г высушенных пекарских дрожжей тщательно растирают вступке для разрушения дрожжевых клеток. Затем в ступку добавляют 5 мл дистиллированной воды и вновь продолжают растирать полученную массу. Через некоторое время полученную суспензию фильтруют через складчатый фильтр. В фильтрате и содержится фермент сахараза.

    2. В 2 пробирки помещают по 1 мл раствора сахаразы и приливают: в 1 пробирку – 1 мл 5 % раствора сахарозы; во 2 – 1 мл 5 % раствора крахмала. Пробирки помещают в водяную баню с температурой 36…38 °С и выдерживают при этой температуре 15 мин.

    3. Из каждой пробирки отбирают пробы объемом около 0,5 мл; добавляют в пробу по 10 капель 10 % раствора NaOH и по 3 капли 1 % раствора CuSO4. Затем пробы перемешивают и нагревают до кипения. Образование красного или желтого осадка свидетельствует о наличии в пробе глюкозы.

    Полученные результаты оформляют в виде таблицы.

    Таблица

    пробы

    Фермент

    (сахараза), мл

    Раствор

    сахарозы, мл

    Раствор

    крахмала, мл

    Наличие

    свободной

    глюкозы

    ОБНАРУЖЕНИЕ ЛЕЦИТИНА В ЖЕЛТКЕ КУРИНОГО ЯЙЦА

    Лецитины, относящиеся к группе фосфолипидов, не растворяются в воде и ацетоне, но хорошо растворяются в этиловом спирте, эфире и хлороформе. Поэтому они могут быть выделены из раствора добавлением ацетона или воды. Для приготовления раствора лецитина в стакан помещают 0,5 желтка куриного яйца и, помешивая, прибавляют 40 мл горячего этилового спирта. Раствор охлаждают и фильтруют в сухую колбу.

    Ход определения

    В сухую пробирку вносят 10 капель ацетона и 1–2 капли концентрированного желтка. Выпадает белый осадок. В другую пробирку прибавляют к 20 каплям спиртового раствора

    желтка несколько капель дистиллированной воды до образования устойчивой эмульсии.

    В третью сухую пробирку вносят 10 капель спиртового раствора желтка и добавляют 2–4 капли насыщенного спиртового раствора CdCl2. Наблюдают выпадение осадка белого цвета. Сделайте заключение о наличии лецитина в желтке куриного яйца.

    ГИДРОЛИЗ ЛЕЦИТИНОВ И ОБНАРУЖЕНИЕ ПРОДУКТОВ ГИДРОЛИЗА

    В результате гидролиза лецитин распадается на составные части: жирные кислоты, холин, глицерин и фосфорную кислоту. В растворе устанавливают их наличие.

    Ход определения

    Обнаружение холина. К 1–2 мл спиртового экстракта желтка добавляют равный объем 10 %-го раствора NaOH и кипятят 5–10 мин. При нагревании ощущается запах селедочного рассола, характерный для триметиламина, образующегося из холина.

    Обнаружение жирных кислот. Полученный гидролизат разбавляют небольшим количеством воды и подкисляют 10 %-м раствором HCl. Выпадает осадок свободных жирных кислот, который отфильтровывают, фильтрат нейтрализуют 10 %-м раствором щелочи и упаривают на водяной бане досуха.

    Обнаружение глицерина. Часть сухого остатка смешивают с несколькими кристаллами KНSO4 и нагревают. При этом ощущается резкий запах акролеина, образовавшегося из глицерина.

    Обнаружение фосфорной кислоты. Другую часть сухого остатка сплавляют в тигле с небольшим количеством KNO3 и Na2CO3. К охлажденному сплаву приливают 2 мл конц. HNO3 и растирают палочкой, раствор сливают в пробирку и нагревают с небольшим избытком молибденовокислого аммония (5–6 мл). При охлаждении образуется желтый кристаллический осадок фосфорномолибденовокислого аммония.

    ОБНАРУЖЕНИЕ ХОЛЕСТЕРИНА

    По химической природе холестерин является циклическим ненасыщенным вторичным спиртом. В основе реакции обнаружения холестерина лежит его способность образовывать окрашенные соединения в присутствии серной кислоты и уксусного ангидрида. Этой реакцией пользуются для количественного определения холестерина в крови. У здоровых взрослых людей в сыворотке крови содержится 1,5–2,5 г/л холестерина. Содержание его увеличивается у людей пожилого возраста, а также при атеросклерозе, заболеваниях печени, нефрозе, при хроническом панкреатите, гипотиреоидите, при сахарном диабете. Уменьшение содержания холестерина в сыворотке крови наблюдается при тяжелых поражениях печени (цирроз в терминальной стадии, некроз), при сердечной недостаточности с застойной печенью, тяжелой уремии, сепсисе, гипертиреоидите.

    Реакция Сальковского. Под действием концентрированной серной кислоты происходит дегидратация холестерина с образованием холестерилена – соединения красного цвета. В сухую пробирку вносят 1 мл хлороформного раствора холестерина или растительного масла и осторожно по стенке пробирки добавляют 0,5 мл конц. H2SO4. На границе жидкостей появляется красное кольцо.

    Реакция Либермана Бурхардта. Эта реакция лежит в основе фотоэлектрокалориметрического метода количественного определения общего холестерина сыворотки крови (по Блюру). В сухую пробирку вносят 1 мл 1 %-го раствора холестерина или растительного масла в хлороформе, 5 капель уксусного ангидрида и наслаивают по стенке 2–3 капли конц. H2SO4. Пробирку помещают на 20 мин в темное место. Постепенно появляется сине-зеленое окрашивание.

    ОБНАРУЖЕНИЕ ЭТАНОЛА В КЕФИРЕ, МОЛОЧНОЙ СЫВОРОТКЕ

    Лактоза молока при гидролизе образует β-галактозу и β-глюкозу (в отчете запишите схему гидролиза). Глюкоза под влиянием ферментов дрожжей может сбраживаться – окисляться до этилового спирта и оксида углерода (IV): C6H12O6 →2C2H5OH + CO2

    Для открытия этанола кефир и молочную сыворотку фильтруют. В пробирки наливают по 5 капель фильтрата кефира и молочной сыворотки и добавляют по 5 капель 10 %-го раствора гидроксида натрия, а также несколько капель 1 %-го раствора йода в 2 %-м йодиде калия. В присутствии этанола жидкость мутнеет, появляется запах йодоформа:

    C2H5OH + 6NaOH + 4I2 →CHI3 + HCOONa + 5NaI + 5H2O

    ОБНАРУЖЕНИЕ МОЛОЧНОЙ КИСЛОТЫ В МОЛОЧНОЙ СЫВОРОТКЕ

    При хранении молока происходит накопление в нем молочной кислоты. Молочная кислота образуется в результате молочнокислого брожения глюкозы, образовавшейся при гидролизе лактозы, присутствующей в молоке: C6H12O6 →2C3H6O3

    Прокисшее молоко фильтруют. С помощью универсального индикатора определяют среду фильтрата. В чистую пробирку приливают 3–5 капли раствора фенола и 2–3 капли раствора хлорида железа (III). К образовавшемуся раствору фенолята железа (III) сине-фиолетового цвета добавляют по каплям полученный фильтрат кислого молока до изменения первоначальной окраски раствора.

    ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИЛАЗЫ КРОВИ ПО ВОЛЬГЕМУТУ

    Принцип метода: Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, сыворотка крови, слюна) основано на нахождении наименьшего количества фермента, необходимого для полного расщепления добавленного крахмала в стандартных условиях.

    Амилазная активность мочи выражается количеством миллилитров 0,1% раствора крахмала, который расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 450С за 15 минут.

    В норме моча человека содержит мало амилазы, происходящей из поджелудочной железы. Активность амилазы (диастазы) мочи обозначается А450 (или d450). В норме активность амилазы мочи равна 16-64 ед.

    Определение активности амилазы в моче и сыворотке крови широко используется в клинической практике с целью диагностики заболеваний поджелудочной железы. При острых панкреатитах амилазная активность мочи и сыворотки крови увеличивается в десятки раз, особенно в первые сутки заболевания, а затем постепенно возвращается к норме. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует.

    В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эпидемическом паротите, что указывает на одновременное поражение поджелудочной железы вирусом паротита.

    Ход работы: Берут 10 пронумерованных пробирок, приливают в каждую по 1 мл 0,85% раствора хлорида натрия. Затем в первую пробирку добавляют 1 мл исследуемой мочи. Содержимое этой пробирки перемешивают, несколько раз втягивая и выпуская жидкость из пипетки. Набирают в пипетку 1 мл смеси и переносят ее во 2-ю пробирку и т.д. до 10-й пробирки. Из 10-й пробирки отбирают 1 мл смеси и выливают. В каждую пробирку добавляют по 1 мл 0,85% раствора хлорида натрия, по 2 мл 0,1% раствора крахмала и, перемешав, все пробирки помещают в термостат на 15 мин. при 45оС. После инкубации пробирки охлаждают водопроводной водой и ставят по порядку в штатив. Прибавляют в каждую пробирку по 2 капли раствора йода и перемешивают. При реакции с йодом жидкость в пробирках окрашивается в желтоватый, розовый и фиолетовый цвет. Отмечают пробирку с наибольшим разведением мочи, при котором произошло полное расщепление крахмала (желтая окраска с йодом). Полученные данные заносят в таблицу.

    пробирки

    1

    2


    Автор: Гусенков Сергей Владимирович
    Похожие материалы
    Тип Название материала Автор Опубликован
    разное экспериментальная работа Гусенков Сергей Владимирович 21 Мар 2015
    разное Экспериментальная работа Калашникова Наталья Владимировна 21 Мар 2015
    разное ПРОЕКТНО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ РАБОТА Терлак Елена Анатольевна 21 Мар 2015
    разное ПРОЕКТНО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ РАБОТА Терлак Елена Анатольевна 21 Мар 2015
    документ экспериментальная работа Коростелева Ольга Ивановна 21 Мар 2015
    разное Опытно-экспериментальная работа в ДОУ. Авдонина Валентина Федоровна 1 Апр 2015
    документ экспериментальная работа (конференция) Латашенко Екатерина Афанасьевна 31 Мар 2015
    документ Экспериментальная работа Бодрова Татьяна Владимировна 24 Дек 2015
    документ Экспериментальная работа Минеева Инна Валерьевна 8 Апр 2015
    разное Экспериментальная работа по формированию самостоятельности у детей старшего дошкольного возраста в проектной деятельности Экспериментальная работа по формированию самостоятельности у детей старшего дошкольного возраста в проектной деятельности Харланчук Ольга Валентиновна 1 Апр 2015
    документ Опытно-экспериментальная работа в процессе ознакомления детей с полезными ископаемыми Опытно-экспериментальная работа в процессе ознакомления детей с полезными ископаемыми Родькина Валентина Григорьевна 5 Апр 2015
    документ Экспериментальная работа Разинкова Нина Александровна 20 Мар 2015
    разное Мастер класс.Опытно-экспериментальная работа Участие в неделях педагогического мастерства Габелкова Елена Вячеславовна 20 Мар 2015
    документ Экспериментальная работа в детском саду. Старшая-подготовительная группа Колоскова Татьяна Яковлевна 30 Мар 2015
    презентация Опытно-экспериментальная работа на учебно-опытном участке Грыжина Ольга Юрьевна 21 Мар 2015
    документ «Облака» (экспериментальная работа с детьми). Козлова Валентина Трофимовна 30 Мар 2015
    презентация Экспериментальная работа. Проблемное обучение как основа проектной деятельности Коростелева Ольга Ивановна 21 Мар 2015
    документ Экспериментальная работа Особенности мотивации в трудовом коллективе ДОУ Брянская Лена Викторовна 30 Мар 2015
    документ Экспериментальная работа "Увлекательный мир книг" Маскайкина Татьяна Анатольевна 30 Мар 2015
    документ Опытно - экспериментальная работа Реуцкая Наталия Николаевна 4 Апр 2015
    документ Опытно - экспериментальная работа в ДОУ Суворова Ольга Васильевна 1 Сен 2015
    документ Опытно-экспериментальная работа по тьюторство. Никифорова Елена Александровна 31 Мар 2015
    документ Экспериментальная работа "Всё начинается с книги". Галдина Ирина Владимировна 7 Июн 2015
    разное Опытно-экспериментальная работа. Программа музыкально-ритмического воспитания спецкурс "Ритмотерапия для детей" Афанасьева Наталья Михайловна 31 Мар 2015
    презентация Экспериментальная работа "Комнатные растения" Хомушку Надежда Самбасовна 27 Апр 2015
    документ Экспериментальная работа по нравственному воспитанию Харитонова Светлана Васильевна 21 Авг 2015
    документ Экспериментальная работа.Исследование состояния связной речи детей старшего дошкольного возраста с общим речевым недоразвитием. Экспериментальная работа Исследование состояния связной речи детей старшего дошкольного возраста с общим речевым недоразвитием. Фисун Лариса Ивановна 4 Июл 2015
    документ «Вода, свойства воды». Экспериментальная деятельность в подготовительной к школе группе. Работа в научных лабораториях. «Вода, свойства воды». Экспериментальная деятельность в подготовительной к школе группе. Работа в научных лабор Егорова Валентина Степановна 31 Мар 2015
    документ «Вода, свойства воды». Экспериментальная деятельность в подготовительной к школе группе. Работа в научных лабораториях. «Вода, свойства воды». Экспериментальная деятельность в подготовительной к школе группе. Работа в научных лабор Метелева Антонина Евгеньевна 23 Сен 2015
    документ Экспериментальная работа по теме:" Методика развития прыгучести" Кучеря Елена Николаевна 21 Мар 2015
    документ Экспериментальная работа по разработке шольного курса "Основы предпринимательской деятельности" Сидимирова Марина Владимировна 21 Мар 2015
    документ ОПЫТНО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ РАБОТА ПО ФОРМИРОВАНИЮ ИНТЕРЕСА К УРОКАМ МУЗЫКИ У УЧАЩИХСЯ ДШИ ПОСРЕДСТВОМ МУЗЫКАЛЬНЫХ КОМПЬЮТЕРНЫХ ОБУЧАЮЩИХ ПРОГРАММ Орел Тим Викторович 21 Мар 2015
    документ Опытно-экспериментальная работа «Построение системы контроля и оценки учебных достижений учащихся 2 класса в соответствии ФГОС НОО» Алехина Татьяна Ивановна 31 Мар 2015
    разное Проектно-экспериментальная работа учителя-логопеда МБОУ "Инсарская средняя общеобразовательная школа №1"Республики Мордовия Родькиной Л.А. Родькина Лариса Александровна 30 Мар 2015
    документ Проектно-экспериментальная работа учителя-логопеда МБОУ "Инсарская СОШ №1"Республики МордовияРодькиной Л.А. Родькина Лариса Александровна 30 Мар 2015
    разное Проектно-экспериментальная работа Родькиной Ларисы Александровны,учителя-логопеда МБОУ "Инсарская средняя общеобразовательная школа №1"Республики Мордовия. Родькина Лариса Александровна 30 Мар 2015
    документ Методическая разработка «Экспериментальная работа по нравственному воспитанию». «Культура общения» Данилова Надежда Петровна 30 Мар 2015
    документ ОПЫТНО - ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ РАБОТА ПО МЕТОДИКЕ ИНОСТРАННОГО ЯЗЫКА «Игровые технологии в формировании иноязычной компетенции школьников» Рявкина Евгения Николаевна 21 Мар 2015
    документ Опытно-экспериментальная работа, направленная на формирование навыков культуры общения у старших дошкольников. Таранова Надежда Сергеевна 30 Мар 2015
    документ "Как органы человека помогают друг другу".Опытно-экспериментальная работа в подготовительной группе ДОУ. Иванова Ольга Михайловна 30 Мар 2015